DeNovix 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀憑借精準(zhǔn)、快速的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞濃度、活力分析等實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景，樣本制備的規(guī)范性直接決定檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。以下為該儀器的樣本制備核心要求：
 

　　一、 樣本前處理基礎(chǔ)要求
 

　　細(xì)胞懸液狀態(tài)控制
 

　　待測(cè)細(xì)胞需處于充分分散的單細(xì)胞懸液狀態(tài)，避免細(xì)胞團(tuán)塊、聚集體的存在。若為貼壁細(xì)胞，需使用胰酶等消化試劑充分消化，消化后加入完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)，反復(fù)吹打 10-15 次，確保細(xì)胞分散均勻；若為懸浮細(xì)胞，可直接輕柔吹打混勻。
 

　　雜質(zhì)與碎片清除
 

　　細(xì)胞懸液中若存在培養(yǎng)基殘?jiān)?、?xì)胞碎片、死細(xì)胞過(guò)多等情況，會(huì)干擾計(jì)數(shù)結(jié)果?？赏ㄟ^(guò)低速離心(1000-1500 rpm，5 min)洗滌細(xì)胞 2-3 次，棄去上清液，再用 PBS 或培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；對(duì)于碎片較多的樣本，可通過(guò) 200 目篩網(wǎng)過(guò)濾后再進(jìn)行后續(xù)操作。
 

　　二、 樣本濃度與稀釋要求
 

　　濃度適配范圍
 

　　DeNovix 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的最佳檢測(cè)濃度為 1×10? - 1×10? 個(gè) /mL，超出該范圍會(huì)導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏差。
 

　　若細(xì)胞濃度過(guò)高，需使用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行梯度稀釋，稀釋時(shí)保證稀釋液與細(xì)胞懸液充分混勻，避免局部濃度不均。
 

　　若細(xì)胞濃度過(guò)低，可通過(guò)離心濃縮(1500 rpm，5 min)后，棄去部分上清液重懸，提高細(xì)胞濃度。
 

　　稀釋液選擇原則
 

　　稀釋液需與細(xì)胞相容性良好，避免使用高滲透壓、強(qiáng)酸堿溶液，防止細(xì)胞裂解或形態(tài)改變。常規(guī)細(xì)胞可選用 PBS 或培養(yǎng)基；對(duì)于特殊敏感細(xì)胞，需使用專用細(xì)胞保存液。
 

　　三、 染色處理要求(針對(duì)活力計(jì)數(shù))
 

　　染色劑選擇與配比
 

　　進(jìn)行細(xì)胞活力檢測(cè)時(shí)，常用臺(tái)盼藍(lán)染色法，染色劑與細(xì)胞懸液需按照 1:1 體積比混合，例如取 10 μL 細(xì)胞懸液 + 10 μL 0.4% 臺(tái)盼藍(lán)染液，輕柔吹打混勻。
 

　　染色劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，或嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求儲(chǔ)存，避免染液變質(zhì)影響染色效果。
 

　　染色時(shí)間控制
 

　　混合后需在 3-5 min 內(nèi)完成上樣檢測(cè)，染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致活細(xì)胞被臺(tái)盼藍(lán)滲透，造成活力計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。
 

　　四、 上樣前樣本處理要求
 

　　樣本混勻操作
 

　　上樣前需再次輕柔吹打細(xì)胞懸液(或染色后的混合液)3-5 次，確保細(xì)胞均勻分布，取懸液中層液體作為待測(cè)樣本，避免吸取底部沉淀或上層泡沫。
 

　　避免氣泡產(chǎn)生
 

　　樣本制備全程需避免劇烈震蕩，防止產(chǎn)生氣泡。若懸液中存在氣泡，可靜置 1-2 min 待氣泡消散，或用移液器輕輕吸走氣泡，否則氣泡會(huì)遮擋計(jì)數(shù)視野，造成結(jié)果誤差。
 

　　五、 樣本制備的注意事項(xiàng)
 

　　所有接觸樣本的耗材(移液器吸頭、離心管等)需為無(wú)菌無(wú)酶材質(zhì)，防止污染細(xì)胞。
 

　　樣本制備需在無(wú)菌環(huán)境下操作，減少外界微生物污染，同時(shí)避免環(huán)境中的灰塵、雜質(zhì)落入懸液。
 

　　不同類型細(xì)胞的制備方法可根據(jù)細(xì)胞特性適當(dāng)調(diào)整，例如干細(xì)胞、原代細(xì)胞需減少吹打次數(shù)，避免細(xì)胞損傷。